एंटी-बायोफिल्म प्रभाव और चांदी नाइट्रेट ड्रेसिंग के उपचार की उत्तेजना

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घावों में माइक्रोबियल वृद्धि अक्सर खुद को बायोफिल्म के रूप में प्रकट करती है, जो उपचार में हस्तक्षेप करती है और मिटाने के लिए मुश्किल होती है। नए सिल्वर ड्रेसिंग घाव के संक्रमण का मुकाबला करने का दावा करते हैं, लेकिन उनके एंटीबायोफिल्म प्रभावकारिता और संक्रमण-स्वतंत्र उपचार प्रभाव आम तौर पर अज्ञात होते हैं। इन विट्रो में और स्टैफिलोकोकस ऑरियस और स्यूडोमोनस एरुगिनोसा के विवो बायोफिल्म मॉडल का उपयोग करते हुए, हम Ag1+ आयन-जनरेटिंग ड्रेसिंग की प्रभावशीलता की रिपोर्ट करते हैं; AG1+ ड्रेसिंग जिसमें एथिलीनमीनेटेटेट्रैसेटिक एसिड और बेंजेथोनियम क्लोराइड (AG1+/EDTA/BC), और सिल्वर नाइट्रेट (AG ऑक्सीसाल्ट्स) युक्त ड्रेसिंग होते हैं। , जो घाव बायोफिल्म का मुकाबला करने और उपचार पर इसके प्रभाव से निपटने के लिए Ag1+, Ag2+ और Ag3+ आयनों का उत्पादन करता है। Ag1+ ड्रेसिंग का इन विट्रो में और चूहों (C57BL/6J) में घाव बायोफिल्म पर न्यूनतम प्रभाव पड़ा। इसके विपरीत, ऑक्सीजन युक्त एजी लवण और एजी 1+/ईडीटीए/बीसी ड्रेसिंग ने इन विट्रो में बायोफिल्म्स में व्यवहार्य बैक्टीरिया की संख्या को काफी कम कर दिया और माउस के घाव बायोफिल्म्स में बैक्टीरिया और ईपीएस घटकों में एक महत्वपूर्ण कमी का प्रदर्शन किया। इन ड्रेसिंग का बायोफिल्म-संक्रमित और गैर-बायोफिल्म-संक्रमित घावों के उपचार पर अलग-अलग प्रभाव थे, जिसमें ऑक्सीजन युक्त नमक ड्रेसिंग के साथ नियंत्रण उपचार और अन्य चांदी की ड्रेसिंग की तुलना में रीपिथेलिअलाइजेशन, घाव के आकार और सूजन पर अधिक लाभकारी प्रभाव पड़ता है। चांदी की ड्रेसिंग के विभिन्न भौतिक रासायनिक गुणों का घाव बायोफिल्म और हीलिंग पर अलग-अलग प्रभाव पड़ सकते हैं, और बायोफिल्म-संक्रमित घावों के उपचार के लिए एक ड्रेसिंग का चयन करते समय इस पर विचार किया जाना चाहिए।
क्रोनिक घावों को "घावों के रूप में परिभाषित किया जाता है जो एक व्यवस्थित और समय पर तरीके से उपचार के सामान्य चरणों के माध्यम से प्रगति करने में विफल होते हैं" 1। क्रोनिक घाव रोगियों और स्वास्थ्य सेवा प्रणाली के लिए एक मनोवैज्ञानिक, सामाजिक और आर्थिक बोझ पैदा करते हैं। 2017-182 में घावों और संबंधित कोमोरिडिटीज के इलाज पर वार्षिक एनएचएस खर्च £ 8.3 बिलियन है। क्रोनिक घाव भी वर्तमान में संयुक्त राज्य अमेरिका में एक दबाव वाली समस्या है, जिसमें मेडिकेयर ने $ 28.1- $ 96.8 बिलियन 3 पर घावों के साथ रोगियों के इलाज की वार्षिक लागत का अनुमान लगाया है।
संक्रमण एक प्रमुख कारक है जो घाव भरने को रोकता है। संक्रमण अक्सर बायोफिल्म के रूप में प्रकट होते हैं, जो 78% गैर-हीलिंग क्रोनिक घावों में मौजूद होते हैं। बायोफिल्म तब बनते हैं जब सूक्ष्मजीव घाव की सतहों जैसे सतहों से अपरिवर्तनीय रूप से जुड़ जाते हैं, और बाह्य रूप से बहुलक (ईपीएस) -प्रोड्यूसिंग समुदायों को बनाने के लिए एकत्र हो सकते हैं। घाव बायोफिल्म ऊतक क्षति के लिए एक बढ़ी हुई भड़काऊ प्रतिक्रिया के साथ जुड़ा हुआ है, जो हीलिंग 4 में देरी या रोक सकता है। ऊतक क्षति में वृद्धि मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनिस, कोलेजनेज, इलास्टेज और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों की बढ़ती गतिविधि के हिस्से के कारण हो सकती है। इसके अलावा, भड़काऊ कोशिकाएं और बायोफिल्म स्वयं ऑक्सीजन के उच्च उपभोक्ता हैं और इसलिए स्थानीय ऊतक हाइपोक्सिया का कारण बन सकते हैं, प्रभावी ऊतक मरम्मत के लिए आवश्यक महत्वपूर्ण ऑक्सीजन की कोशिकाओं को कम करना।
परिपक्व बायोफिल्म रोगाणुरोधी एजेंटों के लिए अत्यधिक प्रतिरोधी हैं, बायोफिल्म संक्रमण को नियंत्रित करने के लिए आक्रामक रणनीतियों की आवश्यकता होती है, जैसे कि यांत्रिक उपचार के बाद प्रभावी रोगाणुरोधी उपचार। क्योंकि बायोफिल्म तेजी से पुन: उत्पन्न कर सकते हैं, प्रभावी रोगाणुरोधी सर्जिकल डिब्रिडमेंट 7 के बाद पुन: गठन के जोखिम को कम कर सकता है।
चांदी का उपयोग रोगाणुरोधी ड्रेसिंग में तेजी से किया जाता है और अक्सर क्रोनिक संक्रमित घावों के लिए पहली पंक्ति के उपचार के रूप में उपयोग किया जाता है। कई व्यावसायिक रूप से उपलब्ध सिल्वर ड्रेसिंग हैं, जिनमें से प्रत्येक में एक अलग चांदी की संरचना, एकाग्रता और बेस मैट्रिक्स हैं। सिल्वर आर्मबैंड में अग्रिमों ने नए सिल्वर आर्मबैंड्स का विकास किया है। चांदी का धातु रूप (AG0) निष्क्रिय है; रोगाणुरोधी प्रभावशीलता प्राप्त करने के लिए, आयनिक चांदी (Ag1+) बनाने के लिए एक इलेक्ट्रॉन खोना होगा। पारंपरिक चांदी की ड्रेसिंग में चांदी के यौगिक या धातु चांदी होती है, जो तरल के संपर्क में आने पर, Ag1+ आयनों के रूप में विघटित होती है। ये Ag1+ आयन बैक्टीरिया सेल के साथ प्रतिक्रिया करते हैं, संरचनात्मक घटकों या अस्तित्व के लिए आवश्यक महत्वपूर्ण प्रक्रियाओं से इलेक्ट्रॉनों को हटाते हैं। पेटेंट तकनीक ने एक नए सिल्वर कंपाउंड, एजी ऑक्सीसाल्ट्स (सिल्वर नाइट्रेट, AG7NO11) का विकास किया है, जो घाव की ड्रेसिंग में शामिल है। पारंपरिक चांदी के विपरीत, ऑक्सीजन युक्त लवण का अपघटन उच्च वैलेंस (Ag1+, Ag2+और Ag3+) के साथ चांदी की अवस्थाओं का उत्पादन करता है। इन विट्रो अध्ययनों से पता चला है कि ऑक्सीजन युक्त चांदी के लवणों की कम सांद्रता रोगजनक बैक्टीरिया जैसे कि स्यूडोमोनस एरुगिनोसा, स्टैफिलोकोकस ऑरियस और एस्चेरिचिया कोलाई 8,9 के खिलाफ एकल आयन चांदी (AG1+) की तुलना में अधिक प्रभावी होती है। एक अन्य नए प्रकार के सिल्वर ड्रेसिंग में अतिरिक्त सामग्री शामिल है, अर्थात् एथिलीनडामिनेटेटेट्रैसेटिक एसिड (ईडीटीए) और बेंजेथोनियम क्लोराइड (बीसी), जो बायोफिल्म ईपीएस को लक्षित करने के लिए सूचित किए जाते हैं और इस तरह से बायोफिल्म में चांदी की पैठ में वृद्धि होती है। ये नई सिल्वर टेक्नोलॉजीज घाव के बायोफिल्म को लक्षित करने के लिए नए तरीके प्रदान करती हैं। हालांकि, घाव के माहौल और संक्रमण-स्वतंत्र उपचार पर इन रोगाणुरोधी का प्रभाव यह सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण है कि वे एक प्रतिकूल घाव वातावरण या देरी उपचार नहीं बनाते हैं। इन विट्रो सिल्वर साइटोटॉक्सिसिटी के बारे में चिंता कई चांदी के ड्रेसिंग 10,11 के साथ बताई गई है। हालांकि, इन विट्रो साइटोटॉक्सिसिटी में अभी तक विवो विषाक्तता में अनुवाद नहीं किया गया है, और कई Ag1+ ड्रेसिंग ने एक अच्छी सुरक्षा प्रोफ़ाइल 12 का प्रदर्शन किया है।
यहां, हमने इन विट्रो में और विवो में घाव बायोफिल्म के खिलाफ उपन्यास चांदी के योगों वाले कार्बोक्सिमिथाइलसेलुलोज ड्रेसिंग की प्रभावशीलता की जांच की। इसके अलावा, प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं और संक्रमण से स्वतंत्र उपचार पर इन ड्रेसिंग के प्रभावों का आकलन किया गया था।
उपयोग किए गए सभी ड्रेसिंग व्यावसायिक रूप से उपलब्ध थे। 3M केरेकल जेल फाइबर ड्रेसिंग (3 एम, नॉट्सफोर्ड, यूके) एक गैर-एंटीमाइक्रोबियल 100% कार्बोक्जाइमिथाइलसेलुलोज (सीएमसी) जेल फाइबर ड्रेसिंग है जो इस अध्ययन में नियंत्रण ड्रेसिंग के रूप में उपयोग किया गया था। तीन एंटीमाइक्रोबियल सीएमसी सिल्वर ड्रेसिंग का मूल्यांकन किया गया था, अर्थात् 3 एम केरेकल एजी ड्रेसिंग (3 एम, नॉट्सफोर्ड, यूके), जिसमें 1.7 wt%होता है। उच्च वैलेंस सिल्वर आयनों (Ag1+, Ag2+और Ag3+) में ऑक्सीजन युक्त चांदी नमक (AG7NO11)। Ag7NO11 के अपघटन के दौरान, Ag1+, Ag2+ और Ag3+ आयन 1: 2: 4 के अनुपात में बनते हैं। एक्वासेल एजी अतिरिक्त ड्रेसिंग जिसमें 1.2% सिल्वर क्लोराइड (AG1+) (Convatec, Deeside, UK) 13 और Aquacel AG+अतिरिक्त ड्रेसिंग जिसमें 1.2% सिल्वर क्लोराइड (AG1+), EDTA और BENZETHONIUM CHLORIDE (Convatec, Deeside, UK) शामिल हैं।
इस अध्ययन में इस्तेमाल किए गए उपभेदों में स्यूडोमोनस एरुगिनोसा एनसीटीसी 10781 (पब्लिक हेल्थ इंग्लैंड, सैलिसबरी) और स्टैफिलोकोकस ऑरियस एनसीटीसी 6571 (पब्लिक हेल्थ इंग्लैंड, सैलिसबरी) थे।
मुलर-हिंटन शोरबा (ऑक्सॉइड, अल्ट्रिनचैम, यूके) में बैक्टीरिया रातोंरात उगाए गए थे। मुलर-हिंटन शोरबा में रात भर की संस्कृति 1: 100 को पतला किया गया था और 200 μl को बाँझ 0.2 माइक्रोन व्हाटमैन साइक्लोपोर झिल्ली (व्हाटमैन पीएलसी, मैडस्टोन, यूके) पर म्यूलर-हिंटन अगर प्लेटों (सिग्मा-एल्ड्रिच कंपनी लिमिटेड, केंट, ग्रेट, ग्रेट, ग्रेट, केंट, केंट, केंट, ग्रेट, )। ) 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर औपनिवेशिक बायोफिल्म गठन। इन औपनिवेशिक बायोफिल्म्स को लॉगरिदमिक संकोचन के लिए परीक्षण किया गया था।
ड्रेसिंग को 3 सेमी 2 वर्ग के टुकड़ों में काटें और बाँझ विआयनीकृत पानी के साथ पूर्व-मिस्टन करें। अगर प्लेट पर कॉलोनी के बायोफिल्म पर पट्टी रखें। बायोफिल्म के प्रत्येक 24 हेक्टेयर को हटा दिया गया था, और बायोफिल्म (सीएफयू/एमएल) के भीतर व्यवहार्य बैक्टीरिया को दिन-कोण न्यूट्रलाइजेशन शोरबा (मर्क-मिलिपोर) में धारावाहिक कमजोर पड़ने (10−1 से 10−7) द्वारा निर्धारित किया गया था। 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन के 24 घंटे के बाद, म्यूलर-हिंटन अगर प्लेटों पर मानक प्लेट काउंट किए गए थे। प्रत्येक उपचार और समय बिंदु को तीन प्रतियों में किया गया था, और प्रत्येक कमजोर पड़ने के लिए प्लेट की गिनती दोहराई गई थी।
पोर्क बेली स्किन यूरोपीय संघ निर्यात मानकों के अनुसार वध के 15 मिनट के भीतर मादा बड़े सफेद सूअरों से प्राप्त की जाती है। त्वचा को अल्कोहल के पोंछे से मुंडा और साफ किया गया था, फिर त्वचा को विचलित करने के लिए 24 घंटे के लिए -80 ° C पर जमे हुए थे। विगलन के बाद, 1 सेमी 2 त्वचा के टुकड़ों को पीबीएस, 0.6% सोडियम हाइपोक्लोराइट और 70% इथेनॉल के साथ तीन बार धोया गया। एपिडर्मिस को हटाने से पहले, बाँझ पीबीएस में 3 बार धोकर किसी भी शेष इथेनॉल को हटा दें। शीर्ष पर 0.45-μm- मोटी नायलॉन झिल्ली (मर्क-मिलिपोर) के साथ त्वचा को 6-अच्छी तरह से प्लेट में सुसंस्कृत किया गया था और 3 एमएल भ्रूण गोजातीय सीरम (सिग्मा) युक्त 10% डल्बेको के संशोधित के साथ 3 एमएल भ्रूण गोजातीय सीरम (मर्क-मिलिपोर) गरुड़। मध्यम (Dulbecco का संशोधित ईगल मीडियम - Aldrich Ltd.)।
बायोफिल्म एक्सपोज़र अध्ययन के लिए वर्णित औपनिवेशिक बायोफिल्म उगाए गए थे। 72 घंटों के लिए झिल्ली पर बायोफिल्म को संवर्धित करने के बाद, बायोफिल्म को एक बाँझ इनोक्यूलेशन लूप का उपयोग करके त्वचा की सतह पर लागू किया गया था और झिल्ली को हटा दिया गया था। बायोफिल्म को तब सुअर के डर्मिस पर 37 डिग्री सेल्सियस पर अतिरिक्त 24 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया था ताकि बायोफिल्म को सुअर की त्वचा का परिपक्व और पालन करने की अनुमति मिल सके। बायोफिल्म परिपक्व होने और संलग्न होने के बाद, 1.5 सेमी 2 ड्रेसिंग, बाँझ आसुत जल के साथ पूर्व-मिस्टेड, सीधे त्वचा की सतह पर लागू किया गया था और 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था। व्यवहार्य बैक्टीरिया को समान रूप से प्रेस्टोब्लू सेल व्यवहार्यता अभिकर्मक (Invitrogen, Life Technologies, Paisley, UK) को प्रत्येक Explant की एपिकल सतह पर लागू करके और 5 मिनट के लिए इसे ऊष्मायन करके धुंधला करके कल्पना की गई थी। Leica MZ8 माइक्रोस्कोप पर छवियों को तुरंत कैप्चर करने के लिए Leica DFC425 डिजिटल कैमरा का उपयोग करें। क्षेत्रों में रंगीन पिंक को छवि प्रो सॉफ्टवेयर संस्करण 10 (मीडिया साइबरनेटिक्स इंक, रॉकविले, एमडी इमेज-प्रो (mediacy.com)) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी नीचे वर्णित के रूप में किया गया था।
रातोंरात उगाए गए बैक्टीरिया को मुलर-हिंटन शोरबा में 1: 100 पतला किया गया। 200 μL संस्कृति को बाँझ 0.2 माइक्रोन व्हाटमैन साइक्लोपोर झिल्ली (व्हाटमैन, मेडस्टोन, यूके) में जोड़ा गया और मुलर-हिंटन अगर पर चढ़ाया गया। बायोफिल्म प्लेटों को परिपक्व बायोफिल्म गठन की अनुमति देने के लिए 72 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था।
बायोफिल्म परिपक्वता के 3 दिनों के बाद, एक 3 सेमी 2 वर्ग पट्टी को सीधे बायोफिल्म पर रखा गया था और 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था। बायोफिल्म की सतह से पट्टी को हटाने के बाद, 20 सेकंड के लिए प्रत्येक बायोफिल्म की सतह में prestoblue सेल व्यवहार्यता अभिकर्मक (Invitrogen, Waltham, MA) के 1 मिलीलीटर को जोड़ा गया था। Nikon D2300 डिजिटल कैमरा (Nikon UK Ltd., किंग्स्टन, UK) का उपयोग करके रंग परिवर्तन से पहले सतहों को सूख गया था।
मुलर-हिंटन अगर पर रातोंरात संस्कृतियों को तैयार करें, व्यक्तिगत उपनिवेशों को 10 एमएल म्यूलर-हिंटन शोरबा में स्थानांतरित करें और 37 डिग्री सेल्सियस (100 आरपीएम) पर एक शेकर पर इनक्यूबेट करें। रातोंरात ऊष्मायन के बाद, संस्कृति को मुलर-हिंटन शोरबा में 1: 100 पतला किया गया था और 300 μl को 0.2 माइक्रोन सर्कुलर व्हाटमैन साइक्लोपोर झिल्ली (व्हाटमैन इंटरनेशनल, मेडस्टोन, यूके) पर देखा गया था। । । परिपक्व बायोफिल्म को नीचे वर्णित के रूप में घाव पर लागू किया गया था।
जानवरों के साथ सभी काम मैनचेस्टर विश्वविद्यालय में पशु कल्याण और नैतिक समीक्षा कार्यालय द्वारा अनुमोदित एक परियोजना लाइसेंस के तहत किया गया था (P8721BD27) और 2012 के संशोधित ASPA के तहत गृह कार्यालय द्वारा प्रकाशित दिशानिर्देशों के अनुसार। सभी लेखकों ने आगमन दिशानिर्देशों का पालन किया। आठ-सप्ताह पुराने C57BL/6J चूहों (Envigo, Oxon, UK) का उपयोग विवो अध्ययनों में सभी के लिए किया गया था। चूहे को आइसोफ्लुरेन (पिरामल क्रिटिकल केयर लिमिटेड, वेस्ट ड्रायटन, यूके) के साथ एनेस्थेटाइज़ किया गया था और उनकी पृष्ठीय सतहों को मुंडा और साफ किया गया था। प्रत्येक माउस को तब एक स्टिफ़ेल बायोप्सी पंच (शूको इंटरनेशनल, हर्टफोर्डशायर, यूके) का उपयोग करके 2 × 6 मिमी एक्सिसल घाव दिया गया था। बायोफिल्म-संक्रमित घावों के लिए, झिल्ली पर उगाए गए 72-घंटे औपनिवेशिक बायोफिल्म को लागू करें जैसा कि चोट के तुरंत बाद एक बाँझ टीकाकरण लूप का उपयोग करके घाव की त्वचीय परत के ऊपर वर्णित है और झिल्ली को छोड़ दें। ड्रेसिंग का एक वर्ग सेंटीमीटर एक नम घाव के माहौल को बनाए रखने के लिए बाँझ पानी के साथ पूर्व-मुिस्त है। ड्रेसिंग को प्रत्येक घाव पर सीधे लगाया गया था और 3M टेगडर्म फिल्म (3M, Bracknell, UK) और मास्टिसोल लिक्विड चिपकने वाला (एलोकेस्ट हेल्थकेयर, फर्नडेल, एमआई) के साथ अतिरिक्त आसंजन प्रदान करने के लिए किनारों के चारों ओर लागू किया गया था। Buprenorphine (AnimalCare, York, UK) को एक एनाल्जेसिक के रूप में 0.1 मिलीग्राम/किग्रा की एकाग्रता में प्रशासित किया गया था। शेड्यूल 1 विधि का उपयोग करके चोट के तीन दिन बाद चूहों को हटा दें और आवश्यकतानुसार घाव क्षेत्र को हटाएं, आधा और स्टोर करें।
हेमेटोक्सिलिन (थर्मोफिशर साइंटिफिक) और ईओसिन (थर्मोफिशर साइंटिफिक) धुंधला निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार किया गया था। घाव क्षेत्र और reepithelialization को छवि प्रो सॉफ्टवेयर संस्करण 10 (मीडिया साइबरनेटिक्स इंक, रॉकविले, एमडी) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था।
टिशू सेक्शन को Xylene (थर्मोफिशर साइंटिफिक, Loughborough, UK) में ओस किया गया था, 100-50% ग्रेडेड इथेनॉल के साथ पुनर्जलीकरण किया गया था, और संक्षेप में विआयनीकृत पानी (थर्मोफिशर साइंटिफिक) में डूब गया था। निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार Immunohistochemistry वेक्टास्टेन एलीट एबीसी पीके -6104 किट (वेक्टर लेबोरेटरीज, बर्लिंगम, सीए) का उपयोग करके किया गया था। न्यूट्रोफिल्स एनआईएमपी-आर 14 (थर्मोफिशर साइंटिफिक) और मैक्रोफेज एमएस सीडी 107 बी प्योर एम 3/84 (बीडी बायोसाइंसेस, वोकिंघम, यूके) के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी 1: 100 को अवरुद्ध समाधान में पतला किया गया और कट सतह में जोड़ा गया, इसके बाद 2 एंटीबॉडी एंटी-वेक्टास्टेन एबीसी और वेक्टर नोवा रेड पेरोक्सीडेज (एचआरपी) सब्सट्रेट किट (वेक्टर लेबोरेटरीज, बर्लिंगम, सीए) और हेमटॉक्सिलिन के साथ काउंटरस्टेड। छवियों को एक ओलंपस BX43 माइक्रोस्कोप और एक ओलंपस DP73 डिजिटल कैमरा (ओलिंप, साउथेंड-ऑन-सी, यूके) का उपयोग करके अधिग्रहित किया गया था।
4 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए 0.1 मीटर हेप्स (पीएच 7.4) में 2.5% ग्लूटाराल्डिहाइड और 4% फॉर्मलाडेहाइड में त्वचा के नमूने तय किए गए थे। नमूनों को ग्रेडेड इथेनॉल का उपयोग करके निर्जलित किया गया था और CO2 में एक कोरम K850 क्रिटिकल पॉइंट ड्रायर (कोरम टेक्नोलॉजीज लिमिटेड, Loughton, UK) का उपयोग करके सुखाया गया था और एक कोरम SC7620 मिनी स्पटरर/ग्लो डिस्चार्ज सिस्टम का उपयोग करके गोल्ड-पैलेडियम मिश्र धातु के साथ लेपित स्पटर। घाव के केंद्रीय बिंदु की कल्पना करने के लिए एक FEI क्वांट 250 स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (थर्मोफिशर साइंटिफिक) का उपयोग करके नमूनों को imaged किया गया था।
TOTO-1 आयोडाइड (2 माइक्रोन) को एक्साइज्ड माउस घाव की सतह पर लागू किया गया था और 37 डिग्री सेल्सियस (थर्मोफिशर साइंटिफिक) पर 5 मिनट के लिए ऊष्मायन किया गया था और 37 डिग्री सेल्सियस (थर्मोफिशर साइंटिफिक) पर SYTO-60 (10 μM) के साथ इलाज किया गया था। 15-मिनट जेड-स्टैक छवियों को एक लीका टीसीएस एसपी 8 का उपयोग करके बनाया गया था।
जैविक और तकनीकी प्रतिकृति डेटा को ग्राफपैड प्रिज्म वी 9 सॉफ्टवेयर (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर, ला जोला, सीए) का उपयोग करके सारणीबद्ध और विश्लेषण किया गया था। डननेट के पोस्ट हॉक परीक्षण का उपयोग करके कई तुलनाओं के साथ विचरण का एक-तरफ़ा विश्लेषण प्रत्येक उपचार और गैर-एंटीमाइक्रोबियल नियंत्रण ड्रेसिंग के बीच अंतर के लिए परीक्षण करने के लिए उपयोग किया गया था। एक पी मान <0.05 को महत्वपूर्ण माना जाता था।
इन विट्रो में स्टैफिलोकोकस ऑरियस और स्यूडोमोनस एरुगिनोसा के बायोफिल्म कॉलोनियों के खिलाफ चांदी के जेल रेशेदार ड्रेसिंग की प्रभावशीलता का आकलन किया गया था। चांदी की ड्रेसिंग में चांदी के अलग -अलग सूत्र होते हैं: पारंपरिक चांदी की ड्रेसिंग Ag1+ आयनों का उत्पादन करती है; चांदी की ड्रेसिंग, जो EDTA/BC के अलावा Ag1+ आयनों का उत्पादन कर सकती है, बायोफिल्म मैट्रिक्स को नष्ट कर सकती है और चांदी के जीवाणुरोधी प्रभाव के तहत चांदी को बैक्टीरिया को उजागर कर सकती है। आयन 15 और ड्रेसिंग जिसमें ऑक्सीजन युक्त एजी लवण होते हैं जो Ag1+, Ag2+ और Ag3+ आयनों का उत्पादन करते हैं। इसकी प्रभावशीलता की तुलना एक गैर-एंटीमाइक्रोबियल नियंत्रण ड्रेसिंग से की गई थी जो कि गेल्ड फाइबर से बने थे। बायोफिल्म के भीतर शेष व्यवहार्य बैक्टीरिया का मूल्यांकन 8 दिनों (चित्रा 1) के लिए हर 24 घंटे में किया गया था। 5 दिन पर, बायोफिल्म को 3.85 × 105s के साथ फिर से स्थापित किया गया था। स्टैफिलोकोकस ऑरियस या 1.22 × 105 पी। बायोफिल्म रिकवरी का आकलन करने के लिए एरुगिनोसा। गैर-एंटीमाइक्रोबियल नियंत्रण ड्रेसिंग की तुलना में, Ag1+ ड्रेसिंग का 5 दिनों में स्टैफिलोकोकस ऑरियस और स्यूडोमोनस एरुगिनोसा बायोफिल्म्स में बैक्टीरिया की व्यवहार्यता पर कम से कम प्रभाव था। इसके विपरीत, ऑक्सीजन युक्त AG और AG1 + + EDTA/BC लवण युक्त ड्रेसिंग 5 दिनों के भीतर बायोफिल्म के भीतर बैक्टीरिया को मारने में प्रभावी थे। 5 दिन पर प्लेंक्टोनिक बैक्टीरिया के साथ दोहराया इनोक्यूलेशन के बाद, बायोफिल्म की कोई बहाली नहीं देखी गई (छवि 1)।
सिल्वर ड्रेसिंग के साथ उपचार के बाद स्टैफिलोकोकस ऑरियस और स्यूडोमोनास एरुगिनोसा बायोफिल्म्स में व्यवहार्य बैक्टीरिया की मात्रा का ठहराव। स्टैफिलोकोकस ऑरियस और स्यूडोमोनस एरुगिनोसा के बायोफिल्म कॉलोनियों का इलाज चांदी की ड्रेसिंग या गैर-एंटीमाइक्रोबियल कंट्रोल ड्रेसिंग के साथ किया गया था, और शेष व्यवहार्य बैक्टीरिया की संख्या हर 24 घंटे में निर्धारित की गई थी। 5 दिनों के बाद, बायोफिल्म को 3.85 × 105s के साथ फिर से स्थापित किया गया था। स्टैफिलोकोकस ऑरियस या 1.22 × 105 पी। बैक्टीरियोप्लांकटन स्यूडोमोनस एरुगिनोसा के उपनिवेशों को बायोफिल्म रिकवरी का आकलन करने के लिए व्यक्तिगत रूप से गठित किया गया था। रेखांकन दिखाते हैं +/- मानक त्रुटि।
बायोफिल्म व्यवहार्यता पर चांदी की ड्रेसिंग के प्रभाव की कल्पना करने के लिए, ड्रेसिंग को पोर्सिन स्किन एक्स विवो पर उगाए गए परिपक्व बायोफिल्म्स पर लागू किया गया था। 24 घंटों के बाद, ड्रेसिंग को हटा दिया जाता है और बायोफिल्म को एक नीले रंग की प्रतिक्रियाशील डाई के साथ दाग दिया जाता है, जो कि एक गुलाबी रंग के लिए जीवित बैक्टीरिया द्वारा चयापचय किया जाता है। नियंत्रण ड्रेसिंग के साथ इलाज किए गए बायोफिल्म गुलाबी थे, जो बायोफिल्म (चित्रा 2 ए) के भीतर व्यवहार्य बैक्टीरिया की उपस्थिति का संकेत देते हैं। इसके विपरीत, एजी ऑक्सीसोल ड्रेसिंग के साथ इलाज किया गया बायोफिल्म मुख्य रूप से नीला था, यह दर्शाता है कि सुअर की त्वचा की सतह पर शेष बैक्टीरिया गैर -बैक्टीरिया (चित्रा 2 बी) थे। मिश्रित नीले और गुलाबी रंग के रूप में Ag1+ -continating ड्रेसिंग के साथ इलाज किए गए बायोफिल्म्स में देखा गया था, जो बायोफिल्म (चित्रा 2C) के भीतर व्यवहार्य और गैर-व्यवहार्य बैक्टीरिया की उपस्थिति का संकेत देता है, जबकि EDTA/BC ड्रेसिंग जिसमें Ag1+ कुछ गुलाबी धब्बों के साथ मुख्य रूप से नीला था। चांदी की ड्रेसिंग (चित्रा 2 डी) से प्रभावित नहीं होने वाले क्षेत्रों का संकेत। सक्रिय (गुलाबी) और निष्क्रिय (नीले) क्षेत्रों की मात्रा का ठहराव से पता चला कि नियंत्रण पैच 75% सक्रिय (चित्रा 2 ई) था। AG1 + + EDTA/BC ड्रेसिंग ने क्रमशः 13% और 14% की जीवित रहने की दर के साथ ऑक्सीजन युक्त AG नमक ड्रेसिंग के समान प्रदर्शन किया। Ag1+ ड्रेसिंग ने भी 21%से बैक्टीरियल व्यवहार्यता को कम कर दिया। इन बायोफिल्म को तब स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (एसईएम) का उपयोग करके देखा गया था। नियंत्रण ड्रेसिंग और Ag1+ ड्रेसिंग के साथ उपचार के बाद, Pseudomonas Aeruginosa की एक परत को पोर्सिन त्वचा (चित्रा 2F, H) को कवर करते हुए देखा गया था, जबकि Ag1+ ड्रेसिंग के साथ उपचार के बाद, कुछ बैक्टीरियल कोशिकाएं पाई गईं और कुछ बैक्टीरियल कोशिकाएं नीचे पाई गईं। कोलेजन फाइबर को पोर्सिन त्वचा (चित्रा 2 जी) की ऊतक संरचना के रूप में माना जा सकता है। Ag1 + + EDTA/BC ड्रेसिंग के साथ उपचार के बाद, बैक्टीरियल पट्टिका और अंतर्निहित कोलेजन फाइबर सजीले टुकड़े दिखाई दे रहे थे (चित्र 2I)।
सिल्वर ड्रेसिंग ट्रीटमेंट के बाद स्यूडोमोनस एरुगिनोसा बायोफिल्म का विज़ुअलाइज़ेशन। । लाइव बैक्टीरिया गुलाबी, गैर-व्यवहार्य बैक्टीरिया हैं और सुअर की त्वचा नीली हैं। (ई) स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी इमेज प्रो संस्करण 10 (FI) का उपयोग करके पोर्सिन स्किन (गुलाबी स्पॉट) पर उगाए गए स्यूडोमोनास एरुगिनोसा बायोफिल्म्स की मात्रा का ठहराव और 24 घंटे के लिए एक सिल्वर ड्रेसिंग या एक गैर-एंटीमाइक्रोबियल कंट्रोल ड्रेसिंग के साथ इलाज किया जाता है। SEM स्केल बार = 5 माइक्रोन। ।
यह निर्धारित करने के लिए कि क्या ड्रेसिंग और बायोफिल्म्स के बीच निकट संपर्क ने ड्रेसिंग की प्रभावशीलता को प्रभावित किया है, एक सपाट सतह पर रखे गए औपनिवेशिक बायोफिल्म को 24 घंटे के लिए ड्रेसिंग के साथ इलाज किया गया था और फिर प्रतिक्रियाशील रंगों के साथ दाग दिया गया था। अनुपचारित बायोफिल्म रंग में गहरा गुलाबी था (चित्रा 2 जे)। ऑक्सीजन युक्त एजी लवण (चित्रा 2K) युक्त ड्रेसिंग के साथ इलाज किए गए बायोफिल्म के विपरीत, बायोफिल्म्स ने एजी 1+ या एजी 1++ ईडीटीए/बीसी वाले ड्रेसिंग के साथ इलाज किया, जिसमें गुलाबी धुंधला (चित्रा 2 एल, एम) के बैंड दिखाए गए। यह गुलाबी रंग व्यवहार्य बैक्टीरिया की उपस्थिति को इंगित करता है और ड्रेसिंग के भीतर सिवनी क्षेत्र से जुड़ा हुआ है। ये सिलना-इन क्षेत्र मृत स्थान बनाते हैं जो बायोफिल्म के भीतर बैक्टीरिया को जीवित रहने की अनुमति देते हैं।
विवो में चांदी की ड्रेसिंग की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए, परिपक्व एस ऑरियस और पी। एरुगिनोसा बायोफिल्म से संक्रमित चूहों के पूर्ण-मोटाई के घावों को नॉनएंटिमाइक्रोबियल नियंत्रण ड्रेसिंग या चांदी के ड्रेसिंग के साथ इलाज किया गया था। 3 दिनों के उपचार के बाद, मैक्रोस्कोपिक छवि विश्लेषण ने गैर-एंटीमाइक्रोबियल कंट्रोल ड्रेसिंग और अन्य सिल्वर ड्रेसिंग (चित्रा 3 ए-एच) की तुलना में ऑक्सीजन युक्त नमक ड्रेसिंग के साथ इलाज किए जाने पर छोटे घाव आकार दिखाए। इन टिप्पणियों की पुष्टि करने के लिए, घावों को काटा गया और घाव क्षेत्र और रीपिथेलिअलाइजेशन को छवि प्रो सॉफ्टवेयर संस्करण 10 (चित्रा 3I-L) का उपयोग करके हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन-सना हुआ ऊतक वर्गों पर निर्धारित किया गया।
घाव की सतह पर चांदी की ड्रेसिंग का प्रभाव और बायोफिल्म से संक्रमित घावों के पुन: उपकलाकरण। (ए -एच) छोटी कोशिकाएं स्यूडोमोनस एरुगिनोसा (ए -डी) और स्टैफिलोकोकस ऑरियस (ई -एच) के बायोफिल्म से संक्रमित हैं, जो एक नॉनएंटिमाइक्रोबियल कंट्रोल ड्रेसिंग के साथ तीन दिनों के उपचार के बाद, एक ऑक्सीजनित एजी नमक ड्रेसिंग, एजी 1+ ड्रेसिंग, और एजी 1+ ड्रेसिंग, और एक एजी 1+ ड्रेसिंग। प्रतिनिधि मैक्रोस्कोपिक चित्र। Ag1 + + EDTA/BC ड्रेसिंग के साथ चूहों के घाव। (आईएल) प्रतिनिधि स्यूडोमोनस एरुगिनोसा संक्रमण, हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन के साथ दागे गए हिस्टोलॉजिकल सेक्शन, घाव क्षेत्र और उपकला उत्थान को निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है। घाव क्षेत्र (एम, ओ) और प्रतिशत रीपिथेलिअलाइजेशन (एन, पी) की मात्रा का निर्धारण स्यूडोमोनास एरुगिनोसा (एम, एन) और स्टैफिलोकोकस ऑरियस (ओ, पी) बायोफिल्म्स (प्रति उपचार समूह एन = 12) से संक्रमित घावों का। रेखांकन दिखाते हैं +/- मानक त्रुटि। * का अर्थ है p = <0.05 ** का अर्थ है p = <0.01; मैक्रोस्कोपिक स्केल = 2.5 मिमी, हिस्टोलॉजिकल स्केल = 500 माइक्रोन।
स्यूडोमोनस एरुगिनोसा बायोफिल्म (चित्रा 3 एम) से संक्रमित घावों में घाव क्षेत्र की मात्रा का ठहराव से पता चला है कि एजी ऑक्सीसाल्ट्स के साथ इलाज किए गए घावों का औसत घाव आकार 2.5 मिमी 2 था, जबकि गैर-एंटीमाइक्रोबियल नियंत्रण ड्रेसिंग का औसत घाव आकार 3.1 मिमी 2 था, जो नहीं है, जो कि नहीं है, जो कि नहीं है, जो कि नहीं है। सत्य। सांख्यिकीय महत्व (चित्रा 3 एम) तक पहुंच गया। पी = 0.423)। Ag1+ या Ag1++ EDTA/BC के साथ इलाज किए गए घावों ने घाव क्षेत्र (3.1 मिमी 2 और 3.6 मिमी 2, क्रमशः) में कोई कमी नहीं दिखाई। ऑक्सीजन युक्त एजी नमक ड्रेसिंग के साथ उपचार ने गैर-एंटीमाइक्रोबियल कंट्रोल ड्रेसिंग (34% और 15%, क्रमशः, पी = 0.029) और एजी 1+ या एजी 1++ ईडीटीए/बीसी (10% और 11%) की तुलना में अधिक हद तक पुन: एपिथेलिअलाइजेशन को बढ़ावा दिया। चित्रा 3 एन)। । , क्रमश)।
घाव क्षेत्र और उपकला उत्थान में इसी तरह के रुझान एस ऑरियस बायोफिल्म्स (चित्रा 3O) से संक्रमित घावों में देखे गए थे। ऑक्सीजन युक्त चांदी के लवणों से युक्त ड्रेसिंग ने घाव क्षेत्र (2.0 मिमी 2) को 23% तक कम कर दिया, जो कि गैर-एंटीमाइक्रोबियल ड्रेसिंग (2.6 मिमी 2) के साथ तुलना में 23% है, हालांकि यह कमी महत्वपूर्ण नहीं थी (पी = 0.304) (छवि 3O)। इसके अलावा, Ag1+ उपचार समूह में घाव क्षेत्र थोड़ा कम हो गया (2.4 मिमी 2), जबकि Ag1++ EDTA/BC ड्रेसिंग के साथ इलाज किए गए घाव ने घाव क्षेत्र (2.9 मिमी 2) को कम नहीं किया। एजी के ऑक्सीजन लवण ने गैर-एंटीमाइक्रोबियल नियंत्रण ड्रेसिंग (12%, पी = 0.003) (चित्रा 3 पी) के साथ इलाज किए गए लोगों की तुलना में एस ऑरियस बायोफिल्म (31%) से संक्रमित घावों के पुन: एपिथेलिअलाइजेशन को भी बढ़ावा दिया। Ag1+ ड्रेसिंग (16%, p = 0.903) और AG+ 1+ EDTA/BC ड्रेसिंग (14%, p = 0.965) ने नियंत्रण के समान उपकला उत्थान के स्तर को दिखाया।
बायोफिल्म मैट्रिक्स पर चांदी की ड्रेसिंग के प्रभाव की कल्पना करने के लिए, टोटो 1 और SYTO 60 आयोडाइड धुंधला प्रदर्शन किया गया था (छवि 4)। टोटो 1 आयोडाइड एक सेल-इम्पेरिमेबल डाई है जिसका उपयोग एक्स्ट्रासेल्युलर न्यूक्लिक एसिड की सटीक रूप से कल्पना करने के लिए किया जा सकता है, जो बायोफिल्म्स के ईपीएस में प्रचुर मात्रा में हैं। SYTO 60 एक सेल पारगम्य डाई है जिसका उपयोग काउंटरस्टेन 16 के रूप में किया जाता है। प्यूडोमोनस एरुगिनोसा (चित्रा 4 ए-डी) और स्टैफिलोकोकस ऑरियस (चित्रा 4I-L) के बायोफिल्म्स के साथ घावों में टोटो 1 और SYTO 60 आयोडाइड के अवलोकन से पता चला कि ड्रेसिंग उपचार के 3 दिनों के बाद, बायोफिल्म में ईपीएस काफी कम हो गया था। ऑक्सीजन युक्त लवण AG और AG1 + + EDTA/BC युक्त। अतिरिक्त एंटीबायोफिल्म घटकों के बिना AG1+ ड्रेसिंग ने स्यूडोमोनस एरुगिनोसा के साथ टीका लगाने वाले घावों में सेल-मुक्त डीएनए को काफी कम कर दिया, लेकिन स्टैफिलोकोकस ऑरियस के साथ टीका लगाया गया घावों में कम प्रभावी थे।
नियंत्रण या चांदी की ड्रेसिंग के साथ उपचार के 3 दिनों के बाद घाव बायोफिल्म के विवो इमेजिंग में। स्यूडोमोनस एरुगिनोसा (ए -डी) और स्टैफिलोकोकस ऑरियस (I -L) की कन्फोकल छवियां एक्स्ट्रासेल्युलर न्यूक्लिक एसिड की कल्पना करने के लिए टोटो 1 (हरे) के साथ दागे गए, बाह्य बायोफिल्म पॉलिमर का एक घटक। इंट्रासेल्युलर न्यूक्लिक एसिड को दागने के लिए, SYTO 60 (लाल) का उपयोग करें। एसिड। पी। स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के घावों का माइक्रोस्कोपी स्यूडोमोनस एरुगिनोसा (ई -एच) और स्टैफिलोकोकस ऑरियस (एम -पी) बायोफिल्म्स से संक्रमित नियंत्रण और चांदी की ड्रेसिंग के साथ उपचार के 3 दिनों के बाद। SEM स्केल बार = 5 माइक्रोन। कन्फोकल इमेजिंग स्केल बार = 50 माइक्रोन।
स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी से पता चला है कि चूहों को स्यूडोमोनस एरुगिनोसा (चित्रा 4 ई-एच) के बायोफिल्म कॉलोनियों के साथ टीका लगाया गया था और स्टैफिलोकोकस ऑरियस (चित्रा 4 एम-पी) के पास ऑल सिल्वर ड्रेसिंग के साथ 3 दिनों के उपचार के बाद उनके घावों में काफी कम बैक्टीरिया थे।
बायोफिल्म-संक्रमित चूहों में घाव की सूजन पर चांदी की ड्रेसिंग के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए, 3 दिनों के लिए नियंत्रण या चांदी की ड्रेसिंग के साथ इलाज किए गए बायोफिल्म-संक्रमित घावों के वर्गों को न्यूट्रोफिल और मैक्रोफेज के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का उपयोग करके इम्यूनोहिस्टोकेमिकली दाग ​​दिया गया था। आंतरिक रूप से न्यूट्रोफिल और मैक्रोफेज का मात्रात्मक निर्धारण। दानेदार ऊतक। चित्रा 5)। सभी सिल्वर ड्रेसिंग ने तीन दिनों के उपचार के बाद गैर-एंटीमाइक्रोबियल कंट्रोल ड्रेसिंग के साथ तुलना में स्यूडोमोनस एरुगिनोसा से संक्रमित घावों में न्यूट्रोफिल और मैक्रोफेज की संख्या को कम कर दिया। हालांकि, ऑक्सीजन युक्त चांदी नमक ड्रेसिंग के साथ उपचार के परिणामस्वरूप अन्य चांदी की ड्रेसिंग (चित्रा 5 आई, जे) की तुलना में न्यूट्रोफिल (पी = <0.0001) और मैक्रोफेज (पी = <0.0001) में अधिक कमी आई। हालांकि Ag1++ EDTA/BC का घाव बायोफिल्म पर अधिक प्रभाव था, लेकिन इसने Ag1+ ड्रेसिंग की तुलना में न्यूट्रोफिल और मैक्रोफेज के स्तर को कुछ हद तक कम कर दिया। एस। ऑरियस बायोफिल्म से संक्रमित मध्यम घावों को एजी (पी = <0.0001), एजी 1+ (पी = 0.0008) और एजी 1 ++ ईडीटीए/बीसी (पी = 0.0043) ऑक्सिसोल के साथ नियंत्रण की तुलना में ड्रेसिंग के बाद भी देखा गया। न्यूट्रोपेनिया के लिए इसी तरह के रुझान देखे जाते हैं। पट्टी (छवि 5k)। हालांकि, केवल ऑक्सीजन युक्त एजी नमक ड्रेसिंग ने एस ऑरियस बायोफिल्म्स (पी = 0.0339) (चित्रा 5 एल) से संक्रमित घावों में नियंत्रण के साथ दानेदार ऊतक में मैक्रोफेज की संख्या में महत्वपूर्ण कमी दिखाई।
गैर-एंटीमाइक्रोबियल नियंत्रण या चांदी के ड्रेसिंग के साथ उपचार के 3 दिनों के बाद प्यूडोमोनस एरुगिनोसा और स्टैफिलोकोकस ऑरियस बायोफिल्म से संक्रमित घावों में न्यूट्रोफिल और मैक्रोफेज की मात्रा निर्धारित की गई थी। न्यूट्रोफिल (एडी) और मैक्रोफेज (ईएच) को न्यूट्रोफिल या मैक्रोफेज के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ दागे गए ऊतक वर्गों में निर्धारित किया गया था। स्यूडोमोनस एरुगिनोसा (I और J) और स्टैफिलोकोकस ऑरियस (K & L) बायोफिल्म्स से संक्रमित घावों में न्यूट्रोफिल (I और K) और मैक्रोफेज (J और L) की मात्रा का ठहराव। N = 12 प्रति समूह। ग्राफ़ का मतलब +/- मानक त्रुटि है, गैर-एंटीबैक्टीरियल कंट्रोल ड्रेसिंग की तुलना में महत्व मान, * का अर्थ है P = <0.05, ** का अर्थ है P = <0.01; *** का अर्थ है p = <0.001; P = <0.0001) इंगित करता है।
हमने तब संक्रमण-स्वतंत्र उपचार पर चांदी की ड्रेसिंग के प्रभाव का आकलन किया। गैर-संक्रमित excisional घावों को 3 दिनों के लिए एक गैर-एंटीमाइक्रोबियल कंट्रोल ड्रेसिंग या सिल्वर ड्रेसिंग के साथ इलाज किया गया था (चित्रा 6)। परीक्षण किए गए चांदी की ड्रेसिंग में, केवल ऑक्सीजन युक्त नमक ड्रेसिंग के साथ इलाज किए गए घावों को नियंत्रण (चित्रा 6 ए-डी) के साथ इलाज किए गए घावों की तुलना में मैक्रोस्कोपिक छवियों पर छोटा दिखाई दिया। हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण का उपयोग करके घाव क्षेत्र की मात्रा का ठहराव से पता चला है कि एजी ऑक्सीसोल्स ड्रेसिंग के साथ उपचार के बाद औसत घाव क्षेत्र 2.35 मिमी 2 था, जो नियंत्रण समूह के साथ इलाज किए गए घावों के लिए 2.96 मिमी 2 की तुलना में था, लेकिन यह अंतर सांख्यिकीय महत्व तक नहीं पहुंचा (पी = 0.488) (अंजीर) (अंजीर) । इसके विपरीत, एग 1+ (3.38 मिमी 2, पी = 0.757) या एजी 1++ ईडीटीए/बीसी (4.18 मिमी 2, पी = 0.054) ड्रेसिंग के साथ उपचार के बाद घाव क्षेत्र में कोई कमी नहीं देखी गई। नियंत्रण समूह (क्रमशः 30% बनाम 22%, क्रमशः) की तुलना में एजी ऑक्सीसोल ड्रेसिंग के साथ बढ़े हुए उपकला उत्थान को देखा गया था, हालांकि यह महत्व (पी = 0.067) तक नहीं पहुंचा, यह काफी महत्वपूर्ण है और पिछले परिणामों की पुष्टि करता है। ऑक्सीसोल के साथ एक ड्रेसिंग री-एपिथेलिअलाइजेशन को बढ़ावा देती है। असिंचित घावों का अध्यादेश 17। इसके विपरीत, Ag1+ या Ag1++ EDTA/BC ड्रेसिंग के साथ उपचार का कोई प्रभाव नहीं पड़ा या नियंत्रण की तुलना में पुन: एपिथेलिअलाइजेशन में कमी आई।
पूर्ण स्नेह के साथ असंक्रमित चूहों में घाव भरने पर चांदी के घाव की ड्रेसिंग का प्रभाव। (AD) एक गैर-एंटीमाइक्रोबियल कंट्रोल ड्रेसिंग और एक सिल्वर ड्रेसिंग के साथ उपचार के तीन दिनों के बाद घावों की प्रतिनिधि मैक्रोस्कोपिक छवियां। (एह) प्रतिनिधि घाव अनुभाग हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन के साथ दागे गए। घाव क्षेत्र की मात्रा (I) और रीपिथेलिअलाइजेशन (J) के प्रतिशत की गणना छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर (n = 11–12 प्रति उपचार समूह) का उपयोग करके घाव के मध्य बिंदु पर हिस्टोलॉजिकल वर्गों से की गई थी। रेखांकन दिखाते हैं +/- मानक त्रुटि। * का अर्थ है P = <0.05।
चांदी में घाव भरने में एक रोगाणुरोधी चिकित्सा के रूप में उपयोग का एक लंबा इतिहास है, लेकिन कई अलग -अलग योगों और वितरण विधियों के परिणामस्वरूप रोगाणुरोधी प्रभावकारिता 18 में अंतर हो सकता है। इसके अलावा, विशिष्ट चांदी वितरण प्रणालियों के एंटीबायोफिल्म गुण पूरी तरह से समझ में नहीं आते हैं। यद्यपि मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया प्लेंक्टोनिक बैक्टीरिया के खिलाफ अपेक्षाकृत प्रभावी है, यह आमतौर पर बायोफिल्म्स 19 के खिलाफ कम प्रभावी है। प्लेंक्टोनिक बैक्टीरिया को मैक्रोफेज द्वारा आसानी से फागोसाइट किया जाता है, लेकिन बायोफिल्म्स के भीतर, एकत्रित कोशिकाएं मेजबान प्रतिक्रिया को इस हद तक सीमित करके अतिरिक्त समस्याएं पैदा करती हैं कि प्रतिरक्षा कोशिकाएं एपोप्टोसिस से गुजर सकती हैं और प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया 20 को बढ़ाने के लिए प्रिनफ्लेमेटरी कारकों को छोड़ सकती हैं। यह देखा गया है कि कुछ ल्यूकोसाइट्स बायोफिल्म्स 21 में प्रवेश कर सकते हैं, लेकिन इस रक्षा से समझौता करने के बाद फागोसाइटोज़ बैक्टीरिया में असमर्थ हैं। घाव बायोफिल्म संक्रमण के खिलाफ मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का समर्थन करने के लिए एक समग्र दृष्टिकोण का उपयोग किया जाना चाहिए। घाव का मलबे शारीरिक रूप से बायोफिल्म को बाधित कर सकता है और अधिकांश बायोबर्डन को हटा सकता है, लेकिन मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया शेष बायोफिल्म के खिलाफ अप्रभावी हो सकती है, खासकर अगर मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया से समझौता किया जाता है। इस प्रकार, चांदी की ड्रेसिंग जैसे रोगाणुरोधी उपचार मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का समर्थन कर सकते हैं और बायोफिल्म संक्रमण को खत्म कर सकते हैं। रचना, एकाग्रता, घुलनशीलता और वितरण सब्सट्रेट चांदी के रोगाणुरोधी प्रभावशीलता को प्रभावित कर सकता है। हाल के वर्षों में, सिल्वर प्रोसेसिंग टेक्नोलॉजी में अग्रिमों ने इन ड्रेसिंग को अधिक प्रभावी बना दिया है। जैसा कि सिल्वर ड्रेसिंग टेक्नोलॉजी आगे बढ़ती है, घाव के संक्रमण को नियंत्रित करने में इन ड्रेसिंग की प्रभावशीलता को समझना महत्वपूर्ण है और इससे भी महत्वपूर्ण बात यह है कि घाव के वातावरण और उपचार पर चांदी के इन शक्तिशाली रूपों का प्रभाव।
इस अध्ययन में, हमने पारंपरिक चांदी की ड्रेसिंग के साथ दो उन्नत चांदी की ड्रेसिंग की प्रभावशीलता की तुलना की, जो इन विट्रो और विवो मॉडल में अलग -अलग उपयोग का उपयोग करके बायोफिल्म्स के खिलाफ Ag1+ आयनों का उत्पादन करते हैं। हमने घाव के माहौल और संक्रमण-स्वतंत्र उपचार पर इन ड्रेसिंग के प्रभाव का भी आकलन किया। डिलीवरी मैट्रिक्स के प्रभाव को कम करने के लिए, परीक्षण किए गए सभी सिल्वर ड्रेसिंग कार्बोक्सिमेथिलसेलुलोज से बने थे।
स्यूडोमोनस एरुगिनोसा और स्टैफिलोकोकस ऑरियस के औपनिवेशिक बायोफिल्म्स के खिलाफ इन चांदी की ड्रेसिंग का हमारा प्रारंभिक मूल्यांकन दिखाता है कि, पारंपरिक एजी 1+ ड्रेसिंग के विपरीत, दो उन्नत सिल्वर ड्रेसिंग, एजी 1++ ईडीटीए/बीसी और ऑक्सीजनित एजी लवण, 5 पर प्रभावी हैं। कुछ दिन। इसके अलावा, ये ड्रेसिंग प्लेंक्टोनिक बैक्टीरिया के बार-बार जोखिम पर बायोफिल्म के पुन: गठन को रोकते हैं। Ag1+ ड्रेसिंग में सिल्वर क्लोराइड, एक ही सिल्वर कंपाउंड और बेस मैट्रिक्स एग 1++ EDTA/BC के रूप में होता है, और इसी अवधि में बायोफिल्म के भीतर बैक्टीरिया की व्यवहार्यता पर सीमित प्रभाव पड़ा। अवलोकन कि एक Ag1++ EDTA/BC ड्रेसिंग एक ही मैट्रिक्स से मिलकर Ag1+ ड्रेसिंग की तुलना में बायोफिल्म के खिलाफ अधिक प्रभावी था और एक सिल्वर कंपाउंड इस धारणा का समर्थन करता है कि बायोफिल्म के खिलाफ चांदी के क्लोराइड की प्रभावशीलता को बढ़ाने के लिए अतिरिक्त सामग्री की आवश्यकता होती है, जैसा कि रिपोर्ट किया गया है। कहीं और 15। ये परिणाम इस विचार का समर्थन करते हैं कि बीसी और ईडीटीए समग्र ड्रेसिंग प्रभावशीलता में योगदान देने वाली एक अतिरिक्त भूमिका निभाते हैं और यह कि एजी 1+ ड्रेसिंग में इस घटक की अनुपस्थिति ने इन विट्रो प्रभावकारिता को प्रदर्शित करने में विफलता में योगदान दिया हो सकता है। हमने पाया कि Ag2+ और Ag3+ आयनों का उत्पादन करने वाले ऑक्सीजन युक्त AG नमक ड्रेसिंग ने Ag1+ और Ag1++ EDTA/BC के समान स्तरों पर मजबूत जीवाणुरोधी प्रभावकारिता का प्रदर्शन किया। हालांकि, उच्च रेडॉक्स क्षमता के कारण, यह स्पष्ट नहीं है कि एजी 3+ आयनों को घाव बायोफिल्म्स के खिलाफ कब तक सक्रिय और प्रभावी रहता है और इसलिए आगे के अध्ययन का गुणगान होता है। इसके अतिरिक्त, कई अलग -अलग ड्रेसिंग हैं जो Ag1+ आयनों को उत्पन्न करते हैं जो इस अध्ययन में परीक्षण नहीं किए गए थे। ये ड्रेसिंग विभिन्न चांदी के यौगिकों, सांद्रता और आधार मैट्रिस से बने होते हैं, जो Ag1+ आयनों की डिलीवरी और बायोफिल्म्स के खिलाफ उनकी प्रभावशीलता को प्रभावित कर सकते हैं। यह भी ध्यान देने योग्य है कि इन विट्रो में कई अलग -अलग हैं और विवो मॉडल में बायोफिल्म्स के खिलाफ घाव ड्रेसिंग की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए उपयोग किया जाता है। उपयोग किए जाने वाले मॉडल के प्रकार, साथ ही इन मॉडलों में उपयोग किए जाने वाले मीडिया के नमक और प्रोटीन सामग्री, ड्रेसिंग की प्रभावशीलता को प्रभावित करेंगे। हमारे विवो मॉडल में, हमने बायोफिल्म को इन विट्रो में परिपक्व होने की अनुमति दी और फिर इसे घाव की त्वचीय सतह पर स्थानांतरित कर दिया। मेजबान माउस प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया घाव पर लगाए गए प्लेंक्टोनिक बैक्टीरिया के खिलाफ अपेक्षाकृत प्रभावी है, जिससे घाव के रूप में एक बायोफिल्म बन जाता है। एक घाव के लिए परिपक्व बायोफिल्म के अलावा, बायोफिल्म के गठन के लिए मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की प्रभावशीलता को सीमित करता है, जिससे परिपक्व बायोफिल्म को घाव के भीतर खुद को स्थापित करने से पहले खुद को स्थापित करने की अनुमति मिलती है। इस प्रकार, हमारा मॉडल हमें घावों को ठीक करने से पहले परिपक्व बायोफिल्म्स पर रोगाणुरोधी ड्रेसिंग की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने की अनुमति देता है।
हमने यह भी पाया कि ड्रेसिंग फिट ने इन विट्रो-ग्रो बायोफिल्म्स और पोर्सिन त्वचा पर चांदी की ड्रेसिंग की प्रभावशीलता को प्रभावित किया। घाव के साथ निकट संपर्क ड्रेसिंग 24,25 के रोगाणुरोधी प्रभावशीलता के लिए महत्वपूर्ण माना जाता है। ऑक्सीजन युक्त एजी लवण युक्त ड्रेसिंग परिपक्व बायोफिल्म के साथ निकट संपर्क में थे, जिसके परिणामस्वरूप 24 घंटे के बाद बायोफिल्म के भीतर व्यवहार्य बैक्टीरिया की संख्या में उल्लेखनीय कमी आई। इसके विपरीत, जब Ag1+ और Ag1++ EDTA/BC ड्रेसिंग के साथ इलाज किया जाता है, तो महत्वपूर्ण संख्या में व्यवहार्य बैक्टीरिया बने रहे। इन ड्रेसिंग में ड्रेसिंग की पूरी लंबाई के साथ टांके होते हैं, जो मृत स्थान बनाते हैं जो बायोफिल्म के साथ निकट संपर्क को रोकते हैं। हमारे इन विट्रो अध्ययनों में, इन गैर-संपर्क क्षेत्रों ने बायोफिल्म के भीतर व्यवहार्य बैक्टीरिया की हत्या को रोक दिया। हमने उपचार के 24 घंटे के बाद ही बैक्टीरियल व्यवहार्यता का आकलन किया; समय के साथ, जैसे -जैसे ड्रेसिंग अधिक संतृप्त हो जाता है, कम मृत स्थान हो सकता है, इन व्यवहार्य बैक्टीरिया के लिए क्षेत्र को कम करता है। हालांकि, यह ड्रेसिंग की रचना के महत्व को उजागर करता है, न कि केवल ड्रेसिंग में चांदी के प्रकार का।
जबकि इन विट्रो अध्ययन विभिन्न चांदी प्रौद्योगिकियों की प्रभावशीलता की तुलना करने के लिए उपयोगी हैं, विवो में बायोफिल्म्स पर इन ड्रेसिंग के प्रभावों को समझना भी महत्वपूर्ण है, जहां मेजबान ऊतक और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं बायोफिल्म्स के खिलाफ ड्रेसिंग की प्रभावशीलता में योगदान करती हैं। घाव बायोफिल्म पर इन ड्रेसिंग का प्रभाव इंट्रासेल्युलर और बाह्य डीएनए रंगों का उपयोग करके बायोफिल्म के स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी और ईपीएस धुंधला का उपयोग करके देखा गया था। हमने पाया कि 3 दिनों के उपचार के बाद, सभी ड्रेसिंग बायोफिल्म-संक्रमित घावों में सेल-फ्री डीएनए को कम करने में प्रभावी थे, लेकिन एजी 1+ ड्रेसिंग स्टैफिलोकोकस ऑरियस-संक्रमित घावों में कम प्रभावी था। स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी ने यह भी दिखाया कि चांदी की ड्रेसिंग के साथ इलाज किए गए घावों में काफी कम बैक्टीरिया मौजूद थे, हालांकि यह Ag1+ ड्रेसिंग की तुलना में ऑक्सीजन युक्त AG नमक ड्रेसिंग और Ag1++ EDTA/BC ड्रेसिंग के साथ अधिक स्पष्ट था। इन आंकड़ों से पता चलता है कि परीक्षण किए गए सिल्वर ड्रेसिंग में बायोफिल्म संरचना पर प्रभाव की डिग्री अलग -अलग थी, लेकिन चांदी की ड्रेसिंग में से कोई भी बायोफिल्म को मिटाने में सक्षम नहीं था, जो घाव बायोफिल्म संक्रमण के उपचार के लिए एक समग्र दृष्टिकोण की आवश्यकता का समर्थन करता है; सिल्वर आर्मबैंड्स का उपयोग। अधिकांश बायोफिल्म को हटाने के लिए उपचार शारीरिक डिब्रिडमेंट से पहले होता है।
क्रोनिक घाव अक्सर गंभीर सूजन की स्थिति में होते हैं, जिसमें समय की विस्तारित अवधि के लिए घाव के ऊतकों में अतिरिक्त भड़काऊ कोशिकाएं शेष होती हैं, जिससे ऊतक क्षति होती है और घाव 26 में कुशल सेलुलर चयापचय और कार्य के लिए आवश्यक ऑक्सीजन को कम कर दिया जाता है। Biofilms इस शत्रुतापूर्ण घाव के माहौल को विभिन्न तरीकों से उपचार को नकारात्मक रूप से प्रभावित करके बढ़ाते हैं, जिसमें सेल प्रसार और प्रवास के निषेध और प्रिनफ्लेमेटरी साइटोकिन्स 27 के सक्रियण शामिल हैं। चूंकि चांदी की ड्रेसिंग अधिक प्रभावी हो जाती है, इसलिए घाव के माहौल और उपचार पर उनके प्रभाव को समझना महत्वपूर्ण है।
दिलचस्प बात यह है कि हालांकि सभी चांदी की ड्रेसिंग ने बायोफिल्म रचना को प्रभावित किया, केवल ऑक्सीजन युक्त चांदी के नमक ड्रेसिंग ने इन संक्रमित घावों के पुन: एपिथेलिअलाइजेशन को बढ़ा दिया। ये डेटा हमारे पिछले निष्कर्षों और कालन एट अल के लोगों का समर्थन करते हैं। (2017) 28, जिसने ऑक्सीजन युक्त चांदी के लवणों की अच्छी सुरक्षा और विषाक्तता प्रोफाइल का प्रदर्शन किया, क्योंकि चांदी की कम सांद्रता बायोफिल्म्स के खिलाफ प्रभावी थी।
हमारा वर्तमान अध्ययन रोगाणुरोधी चांदी की ड्रेसिंग और घाव के माहौल और संक्रमण-स्वतंत्र उपचार पर इस तकनीक के प्रभाव के बीच चांदी की तकनीक में अंतर पर प्रकाश डालता है। हालांकि, ये परिणाम पिछले अध्ययनों से अलग -अलग हैं जो दिखाते हैं कि Ag1 + + EDTA/BC ड्रेसिंग ने विवो में घायल खरगोश कानों के उपचार मापदंडों में सुधार किया है। हालांकि, यह पशु मॉडल, माप समय और बैक्टीरियल अनुप्रयोग विधियों में अंतर के कारण हो सकता है। इस मामले में, घाव के माप को चोट के 12 दिन बाद लिया गया था ताकि ड्रेसिंग के सक्रिय अवयवों को लंबे समय तक बायोफिल्म पर कार्य करने की अनुमति दी जा सके। यह एक अध्ययन द्वारा समर्थित है जिसमें दिखाया गया है कि Ag1 + + EDTA/BC के साथ इलाज किए गए नैदानिक ​​रूप से संक्रमित लेग अल्सर शुरू में उपचार के एक सप्ताह के बाद आकार में वृद्धि हुई हैं, और फिर Ag1 + + EDTA/BC के साथ और 4 सप्ताह के भीतर उपचार के अगले 3 सप्ताह के दौरान और 4 सप्ताह के भीतर गैर-एंटीमाइक्रोबियल का उपयोग। ड्रग्स। अल्सर 30 के आकार को कम करने के लिए सीएमसी ड्रेसिंग।
चांदी के कुछ रूपों और सांद्रता को पहले इन विट्रो 11 में साइटोटॉक्सिक दिखाया गया है, लेकिन ये इन विट्रो परिणाम हमेशा विवो में प्रतिकूल प्रभावों में अनुवाद नहीं करते हैं। इसके अलावा, चांदी प्रौद्योगिकी में प्रगति और ड्रेसिंग में चांदी के यौगिकों और सांद्रता की बेहतर समझ के कारण कई सुरक्षित और प्रभावी चांदी की ड्रेसिंग का विकास हुआ है। हालांकि, सिल्वर ड्रेसिंग टेक्नोलॉजी के रूप में, घाव पर्यावरण 31,32,33 पर इन ड्रेसिंग के प्रभाव को समझना महत्वपूर्ण है। यह पहले बताया गया था कि पुन: एपिथेलिअलाइजेशन की बढ़ी हुई दर प्रो-भड़काऊ एम 1 फेनोटाइप की तुलना में विरोधी भड़काऊ एम 2 मैक्रोफेज के बढ़े हुए अनुपात से मेल खाती है। यह पिछले माउस मॉडल में नोट किया गया था जहां सिल्वर हाइड्रोजेल घाव ड्रेसिंग की तुलना सिल्वर सल्फाडियाज़िन और गैर-एंटीमाइक्रोबियल हाइड्रोजेल्स 34 के साथ की गई थी।
क्रोनिक घाव अत्यधिक सूजन का प्रदर्शन कर सकते हैं और यह देखा गया है कि अतिरिक्त न्यूट्रोफिल की उपस्थिति घाव भरने के लिए हानिकारक हो सकती है। न्यूट्रोफिल-विघटित चूहों में एक अध्ययन में, न्यूट्रोफिल की उपस्थिति ने रीपिथेलिअलाइजेशन में देरी की। अतिरिक्त न्यूट्रोफिल की उपस्थिति से प्रोटीज और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के उच्च स्तर की ओर जाता है, जैसे कि सुपरऑक्साइड और हाइड्रोजन पेरोक्साइड, जो क्रोनिक और धीमी-उपचार घावों के साथ जुड़े होते हैं। इसी तरह, मैक्रोफेज संख्या में वृद्धि, अगर अनियंत्रित हो, तो घाव भरने में देरी हो सकती है। यह वृद्धि विशेष रूप से महत्वपूर्ण है यदि मैक्रोफेज एक प्रो-इंफ्लेमेटरी फेनोटाइप से एक प्रो-हीलिंग फेनोटाइप में संक्रमण करने में असमर्थ हैं, जिसके परिणामस्वरूप घाव हीलिंग 40 के भड़काऊ चरण से बाहर निकलने में विफल हो जाते हैं। हमने सभी चांदी के ड्रेसिंग के साथ उपचार के 3 दिनों के बाद बायोफिल्म-संक्रमित घावों में न्यूट्रोफिल और मैक्रोफेज में कमी देखी, लेकिन ऑक्सीजन युक्त नमक ड्रेसिंग के साथ कमी को अधिक स्पष्ट किया गया था। यह कमी चांदी के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का प्रत्यक्ष परिणाम हो सकती है, बायोबर्डन को कम करने की प्रतिक्रिया, या घाव को उपचार के बाद के चरण में और इसलिए घाव में प्रतिरक्षा कोशिकाओं को कम किया जा रहा है। घाव में भड़काऊ कोशिकाओं की संख्या को कम करने से घाव भरने के लिए अनुकूल वातावरण बनाए रखा जा सकता है। एग ऑक्सीज़ल्ट्स संक्रमण-स्वतंत्र उपचार को कैसे बढ़ावा देते हैं, इसकी कार्रवाई का तंत्र अस्पष्ट है, लेकिन ऑक्सीजन का उत्पादन करने और हाइड्रोजन पेरोक्साइड के हानिकारक स्तरों को नष्ट करने के लिए एजी ऑक्सीज़ल्ट्स की क्षमता, सूजन का एक मध्यस्थ, इसे समझा सकता है और आगे के अध्ययन की आवश्यकता है।
क्रोनिक नॉन-हीलिंग संक्रमित घाव डॉक्टरों और रोगियों दोनों के लिए एक समस्या पैदा करते हैं। हालांकि कई ड्रेसिंग एंटीमाइक्रोबियल प्रभावशीलता का दावा करते हैं, अनुसंधान शायद ही कभी घाव माइक्रोएन्वायरमेंट को प्रभावित करने वाले अन्य प्रमुख कारकों पर ध्यान केंद्रित करता है। इस अध्ययन से पता चलता है कि विभिन्न चांदी प्रौद्योगिकियों में अलग -अलग रोगाणुरोधी प्रभावकारिता होती है और, महत्वपूर्ण रूप से, घाव के वातावरण और उपचार पर अलग -अलग प्रभाव, संक्रमण से स्वतंत्र होते हैं। यद्यपि ये इन विट्रो और विवो अध्ययनों में घाव के संक्रमण के इलाज में इन ड्रेसिंग की प्रभावशीलता को दर्शाते हैं और उपचार को बढ़ावा देते हैं, क्लिनिक में इन ड्रेसिंग की प्रभावशीलता का मूल्यांकन करने के लिए यादृच्छिक नियंत्रित परीक्षणों की आवश्यकता होती है।
वर्तमान अध्ययन के दौरान उपयोग किए गए और/या विश्लेषण किए गए डेटासेट उचित अनुरोध पर संबंधित लेखक से उपलब्ध हैं।